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BioThema 266-112說(shuō)明書(shū)

更新時(shí)間:2018-12-11點(diǎn)擊次數(shù):1736

BioThema*專注于螢火蟲(chóng)熒光素酶反應(yīng)的分析應(yīng)用,無(wú)論是檢測(cè)細(xì)胞,測(cè)量酶活性還是其他東西。在該反應(yīng)中,用ATP(三磷酸腺苷)活化熒光素,然后氧化成氧化熒光素和CO 2。氧化熒光素以激發(fā)態(tài)形成,并在進(jìn)入其基態(tài)時(shí)發(fā)光。通常在所謂的發(fā)光計(jì)中測(cè)量光。

ATP + 熒光素+ O 2 -熒光素酶 - > AMP +焦磷酸+氧化熒光素+ CO 2 +光

在ATP的測(cè)定中,光發(fā)射可以基本上恒定或快速衰減。因此,基于螢火蟲(chóng)熒光素酶反應(yīng),存在穩(wěn)定的光和閃光型ATP試劑。在熒光素酶水平低的情況下,每分鐘消耗的ATP比例可以忽略不計(jì),然后光可以幾乎恒定但也很低。在高水平的熒光素酶下,ATP被消耗是不可避免的,導(dǎo)致光迅速減少,但初峰值光很高。實(shí)際上,峰高和衰減率都與熒光素酶活性成比例。BioThema開(kāi)發(fā)了三種ATP試劑

BioThema 266-112說(shuō)明書(shū)

Microbial ATP Kit HS微生物ATP試劑盒HS

用于測(cè)定哺乳動(dòng)物細(xì)胞中細(xì)菌細(xì)胞中的細(xì)胞內(nèi)ATP

該試劑盒的靈敏度可以在各種情況下測(cè)定低ATP水平:
1。液體的細(xì)菌控制(如飲用水,工藝用水,飲料和啤酒)
2。藥品和化妝品
3.細(xì)胞與表面的粘附
4.質(zhì)量保證洗衣
5.細(xì)菌生長(zhǎng)。
6.對(duì)細(xì)菌的抗生素作用

SKU:266-112

 

應(yīng)用

該試劑盒用于測(cè)定微生物細(xì)胞中的細(xì)胞內(nèi)ATP(三磷酸腺苷)。大多數(shù)類型的體細(xì)胞,例如血細(xì)胞用中性洗滌劑裂解。樣品中釋放的ATP和其他形式的細(xì)胞外ATP被酶促降解。如果目的是確定細(xì)菌和體細(xì)胞中的細(xì)胞內(nèi)ATP,我們建議不含裂解劑的266-111細(xì)胞內(nèi)ATP試劑盒。所有活細(xì)胞都含有ATP,它在不同細(xì)胞過(guò)程之間起著能量貨幣的作用。當(dāng)細(xì)胞死于自然原因時(shí),ATP通常會(huì)降解。在所有類型的細(xì)胞中,小心地將ATP的細(xì)胞內(nèi)濃度調(diào)節(jié)至相似水平。因此,ATP是細(xì)胞內(nèi)總體積的良好估計(jì)。大多數(shù)細(xì)菌細(xì)胞含有大約。2×10 -18每個(gè)細(xì)胞的摩爾ATP,而大多數(shù)真核細(xì)胞由于其較大的尺寸,含有10-15摩爾ATP或更多。ATP生物質(zhì)試劑盒HS,細(xì)胞內(nèi)ATP試劑盒HS和微生物ATP試劑盒HS含有具有高熒光素酶活性的ATP試劑HS(高靈敏度)。ATP試劑HS中的熒光素酶活性實(shí)際上非常高,如果在重構(gòu)過(guò)程中受到污染,它將每38分鐘將ATP背景降低一個(gè)數(shù)量級(jí)。混合樣品和ATP試劑HS后,光強(qiáng)度衰減約。每分鐘6%。這足夠慢以允許手動(dòng)混合,并且可以使用沒(méi)有試劑分配器的管發(fā)光計(jì)。試劑的檢出限為10×10 -18使用靈敏的光度計(jì)測(cè)量ATP。這相當(dāng)于5個(gè)細(xì)菌細(xì)胞。我們必須在這里區(qū)分細(xì)菌細(xì)胞和CFU,因?yàn)橐粋€(gè)CFU可能由幾個(gè)細(xì)胞組成。如果檢測(cè)限不充分,可以通過(guò)微濾濃縮樣品,這一過(guò)程也可以去除細(xì)胞外ATP(請(qǐng)聯(lián)系BioThema獲取更多信息)。

儀器

可以使用任何管發(fā)光計(jì)。應(yīng)該注意的是,管發(fā)光計(jì)比微孔板發(fā)光計(jì)靈敏度大約一個(gè)數(shù)量級(jí)。如果使用微孔板發(fā)光計(jì),它應(yīng)該至少有兩個(gè)分配器,并且應(yīng)該能夠混合微孔板(參見(jiàn)測(cè)定程序)。

分析程序

詳細(xì)描述的程序可在“使用說(shuō)明”中找到,該說(shuō)明書(shū)隨每個(gè)套件一起提供。

產(chǎn)品特性

該試劑盒包含用于150-375測(cè)定的試劑(每個(gè)小瓶ATP試劑HS足以在管發(fā)光計(jì)中進(jìn)行25次測(cè)定,在微孔板發(fā)光計(jì)中進(jìn)行62.5次測(cè)定)。

檢測(cè)限:

使用靈敏的發(fā)光計(jì),試劑的檢出限為10×10 -18 mol ATP。

參考

1 Lundin,A。(2000)在生物量,酶和代謝物的ATP相關(guān)測(cè)定中使用螢火蟲(chóng)熒光素酶。方法Enzymol。305,346-370。
2 Lundin,A。(1999)ATP檢測(cè)生物污染。在“30th R3-Nordic Contamination Control Symposium”(Eds.G.Wirtanen,S.Salo and A. Mikkola),VTT,Espoo,F(xiàn)inland,pp.337-352。

 

 

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