Cytoskeleton，Inc.成立于1993年。自成立以來，我們一直在不斷擴大產(chǎn)品范圍。
Cytoskeleton，Inc.很高興為藥物篩選，信號轉(zhuǎn)導和細胞骨架研究提供廣泛的試劑盒和產(chǎn)品。我們專注于純化蛋白的生產(chǎn)和易于使用的試劑盒，以研究生化和細胞過程。我們的試劑盒既可用于基礎研究或小型篩查的少量樣品（Biochem Kits™），也可用于大型篩查的高通量規(guī)模（CytoDYNAMIX Screens™）。
除了我們現(xiàn)有的產(chǎn)品，我們還提供產(chǎn)品系列中微管，微管蛋白，運動蛋白，小G蛋白效應物，GAP，GEF和其他幾種蛋白的藥物篩選服務。
cytoskeleton BK033-S說明書
Amount
20 assays (Cat. # BK033-S)
產(chǎn)品用途包括
介紹
與Ras相關的小G蛋白的哺乳動物ADP核糖基化因子（Arf）亞家族初被命名為具有刺激霍亂毒素介導 的許多GPCR使用的Gsα亞基的ADP核糖基化的能力（1）。根據(jù)其大小和氨基酸相似性，將Arf GTPases分為三類：I類（Arf6和Arf3），II類（Arf4和Arf5）和III類（Arf6）。Arf6的主要作用之一是蛋白質(zhì)從質(zhì)膜轉(zhuǎn)運到內(nèi)吞區(qū)室（例如GPCR），并且似乎在某些GPCR的順行轉(zhuǎn)運中起作用（3、4）。像Arf1一樣，Arf6部分地通過脂質(zhì)修飾酶的激活來改變局部膜環(huán)境（3）。
與其他小G蛋白一樣，Arf6在無效的GDP結合狀態(tài)和有效的GTP結合狀態(tài)之間循環(huán)。效應蛋白與GTP結合的Arf6與GDP結合的狀態(tài)的優(yōu)先結合為Arf6在細胞中的功能提供了基礎。效應蛋白與Arf6-GTP的這種高度特異性的聯(lián)系已被用于開發(fā)親和沉淀測定法以監(jiān)測Arf6的活化（5）。
細胞骨架的Arf6活化檢測法Biochem Kit™利用效應蛋白GGA3（含有高爾基體的γ-耳，含有Arf結合蛋白3）的Arf6蛋白結合域（PBD），該蛋白已被證明與GTP結合形式Arf6（5，6）。我們已經(jīng)在大腸桿菌中共價結合了純化的GGA3-PBD（氨基酸1-316）試劑盒中提供的彩色瓊脂糖珠（圖1）。使用這些珠子，研究人員能夠使用該試劑盒中提供的Arf6特異性抗體，“下拉” Arf6-GTP并定量活性Arf6的水平，隨后進行蛋白質(zhì)印跡步驟。該測定法提供了一種分析各種系統(tǒng)中細胞Arf6激活水平的簡單方法。下面的圖2顯示了典型的Arf6下拉測定法，使用的是GTPγS和GDP負載的MDCK細胞提取物，或已經(jīng)收獲并保持懸浮狀態(tài)或鋪在纖連蛋白包被的培養(yǎng)皿中的MDCK細胞提取物（例如，參見參考文獻7， 8）。
試劑盒內(nèi)容
試劑盒包含足夠的材料，可用于20種測定，具體取決于測定的設置，并包括用于陽性和陰性對照的試劑。包括以下組件：
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| 圖1. BK033-S中鮮艷的谷胱甘肽瓊脂糖珠使該試劑盒易于使用。 |
結果示例
圖2顯示了典型的Arf6下拉測定法，使用的是GTPγS和GDP負載的MDCK細胞提取物，或者是已收獲并保持懸浮狀態(tài)或鋪在纖連蛋白包被的培養(yǎng)皿上的MDCK細胞提取物（例如，參見參考文獻7、8 ）。
圖2. Arf6激活測定Biochem Kit™下拉測定結果。
上： 使用產(chǎn)品手冊第VI節(jié)：對照反應中所述的方法，將裝有GTPγS（GTP泳道）或GDP（GDP泳道）的MDCK細胞裂解液（500 µg）裝滿。
底部： 從懸液中懸浮2小時（Sus）或在組織培養(yǎng)板（Rp）上生長的細胞獲得的MDCK細胞裂解物（500 ug）。所有提取物均與20μgGGA3-PBD珠一起孵育，并按照產(chǎn)品手冊第VI節(jié)：Pulldown分析中所述進行處理。將所有珠子樣品重懸于20 µl 2x樣品緩沖液中，然后在4-20％SDS-PAGE凝膠上分離，轉(zhuǎn)移至PVDF，以1：250稀釋的抗Arf6抗體進行探測，并按照所述方法進行化學發(fā)光檢測在產(chǎn)品手冊的第六節(jié)：STEP 4中。
參考文獻
