疏水相互作用色譜法是一種成熟的方法，可根據(jù)蛋白質(zhì)的表面電荷和疏水性純化蛋白質(zhì)。提供疏水表面的色譜基質(zhì)用于分離。這種方法不需要將任何親和標(biāo)簽融合到要純化的蛋白質(zhì)上。因此它適用于天然和重組蛋白的純化。我們提供疏水相互作用基質(zhì)，其表面具有苯基、辛基或丁基。對于一種新型蛋白質(zhì)，強烈建議比較不同的基質(zhì)，并且可以使用含有少量每種基質(zhì)的 HIC 篩選集。我們的 PureCube 瓊脂糖基于 BioWorks Workbeads，提供高的結(jié)合能力和可重復(fù)的結(jié)果，尤其是在 FPLC 色譜應(yīng)用中。

HIC 分離基于蛋白質(zhì)的疏水區(qū)域與表面上含有疏水基團（例如丁基、辛基或苯基）的色譜介質(zhì)的相互作用。高離子強度增強了這種相互作用，使 HIC 成為硫酸銨沉淀后或在高鹽緩沖液中從離子交換介質(zhì)洗脫后的理想純化步驟。

蛋白質(zhì)可能在非常高的鹽濃度下沉淀，因此建議在小規(guī)模實驗中測試感興趣的蛋白質(zhì)是否以結(jié)合所需的鹽濃度保持在溶液中。

結(jié)合的蛋白質(zhì)可以用低鹽緩沖液洗脫。強烈建議使用鹽梯度（例如硫酸銨或氯化鈉）進行洗脫，以確保蛋白質(zhì)保持在穩(wěn)定所需的*佳鹽濃度。

與等電點測定相比，很難預(yù)測蛋白質(zhì)的整體疏水性，因為只有蛋白質(zhì)表面上的孤立斑塊可能是疏水性的，但足以與 HIC 基質(zhì)相互作用。因此，建議測試不同的樹脂是否適合以使蛋白質(zhì)保持在溶液中的濃度結(jié)合感興趣的蛋白質(zhì)，以適合蛋白質(zhì)穩(wěn)定性和活性的鹽濃度將其洗脫，同時將其與污染蛋白質(zhì)分離。PureCube HIC 入門套件是為輕松比較三種不同材料而開發(fā)的。

圖 1：疏水相互作用基質(zhì)中使用的官能團的化學(xué)結(jié)構(gòu)。

圖 2：在 PureCube Phenyl Agarose 和競爭產(chǎn)品上純化兩種測試蛋白。對于較大的測試蛋白質(zhì)（BSA，66 kDa），兩種 HIC 樹脂均獲得了約 25 mg/mL 的樹脂產(chǎn)量。對于較小的測試蛋白（14 kDa），PureCube 基質(zhì)的產(chǎn)量大約高出 4 倍（PureCube：45 mg/mL，競爭對手 G：11 mg/mL）。純化分批進行，在 1.5 M 硫酸銨、100 mM NaH2PO4、pH 7.0 下結(jié)合和洗滌，并在 100 mM NaH2PO4、pH 7.0 下洗脫。E1、E2：洗脫級分 1 和 2。

此列表包括適用于所有 HIC 瓊脂糖產(chǎn)品的功能。如果在特定功能中存在差異，則會提及。