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haemtech HCII-0190說明書

 發(fā)布時間:2018/11/3 點擊量:445

 

 

haemtech Haematologic Technologies,Inc。(HTI/haemtech)是一家ISO 9001:2015注冊公司,是一家專業(yè)從事體外研究用高質量血漿蛋白分離和表征的主要制造商。HTI的重點是凝血級聯(lián)中涉及的蛋白質,以及骨代謝的調節(jié)。HTI產品系列包括超過150種高度純化和充分表征的蛋白質,包括酶原,酶,輔因子和抑制劑,以及單克隆和多克隆抗體的互補系列。還可提供因子缺乏的等離子體和定制的血液采集管,用于臨床研究。提供的服務包括定制蛋白質純化,蛋白質修飾,化驗開發(fā),合同制造和合同研究。

haemtech HCII-0190說明書

Human Heparin Cofactor II

人肝素輔助因子II

肝素輔因子II抑制凝血酶
凝血酶(IIa),肝素(HEP)和肝素輔因子II(HCII)通過隨機順序雙反應機制相互作用形成三元復合物。隨著凝血酶與肝素輔助因子II形成共價復合物,肝素隨后從復合物解離。

 

HCII-0190 Human Heparin Cofactor II

Size

100µg

Formulation

50% (vol/vol) Glycerol/H2O

Molecular Weight

 

 

Storage

-20°C

Purity

>95% by SDS-PAGE

Compound

 

 

Assay

Thrombin inhibition

Shelf Life (properly stored)

12 months

Chemical Formula

 

 

肝素輔助因子II(HCII)(肝素輔助因子A,抗凝血酶BM,硫酸皮膚素輔因子,人類leuserpin-2)是絲氨酸蛋白酶抑制劑(絲氨酸蛋白酶抑制劑)家族的單鏈糖蛋白(Mr = 65,600,10%碳水化合物)成員(1- 3)。肝素輔因子II的氨基酸序列分析顯示3個潛在的N-糖基化位點和2個位于NH2-末端附近的7個殘基的兩個內部重復的硫酸化酪氨酸(4-6)。血漿濃度估計為90μg/ ml(2)。

在凝血級聯(lián)中,肝素輔助因子II通過在存在(k2 = 4.5×10 8 M -1 min -1)和不存在(k2 = 5.0×10 5 M -1 min -1)的情況下形成雙分子復合物來抑制凝血酶。)肝素(2,7-9)。這種復合物對變性劑是穩(wěn)定的并且基本上是不可逆的。除肝素外,多種多陰離子化合物可加速HCII對凝血酶的抑制作用(3)。在這些化合物中值得注意的是硫酸皮膚素,其加速HCII對凝血酶的抑制,但不加速抗凝血酶III(1,6)。該特征已被用于開發(fā)特異于肝素輔助因子II的基于血漿的測定。盡管HCII與其他serpins僅顯示約25%的序列同源性,但凝血酶抑制時釋放的反應位點肽(COOH-末端36個氨基酸)與凝血酶從抗凝血酶III(AT III)釋放的反應位點肽同源性為53%(4,9) )。HCII中的易斷裂鍵是Leu-Ser,這對于精氨酸特異性蛋白酶抑制劑是不常見的(4,9)。與AT III相比,HCII抑制的僅有凝血蛋白酶是凝血酶,HCII抑制的其他蛋白酶包括α-胰凝乳蛋白酶,中性粒細胞組織蛋白酶G和灰色鏈霉菌蛋白酶B(3)。肝素輔助因子II的主要生理作用可能仍有待發(fā)現(xiàn)。

通過修改Griffith等人的方法(9),從新鮮冷凍血漿制備肝素輔助因子II。在SDS PAGE上評估純度,并且基于在肝素存在下的凝血酶抑制來確定活性。HCII以50%(體積/體積)甘油/ H 2 O供應,在-20℃下儲存。

 

 

凝膠

Novex 4-12%Bis-Tris

加載

人肝素輔助因子II,每泳道1μg

緩沖

MOPS

標準

SeeBluePlus 2; 肌球蛋白(191 kDa),磷酸化酶B(97 kDa),BSA(64 kDa),谷氨酸脫氫酶(51 kDa),酒精脫氫酶(39 kDa),碳酸酐酶(28 kDa),肌紅蛋白紅(19 kDa),溶菌酶(14 kDa的)

本土化

等離子體

血漿濃度

90μg/ ml(2)

行動方式

絲氨酸蛋白酶抑制劑; 抑制凝血酶,α-胰凝乳蛋白酶,中性粒細胞組織蛋白酶G,灰色鏈霉菌蛋白酶B

分子量

65,600(2)

消光系數(shù)

Ë

1%

1厘米,280納米

 

= 5.93(5)

 

等電點

4.95-5.15(2)

結構體

單鏈糖蛋白,3個潛在的N-糖基化位點,兩個7-氨基酸殘基重復序列,反應位點序列:TVTTVGFMPL-STQVRFTVDR(4)

碳水化合物百分比

9.9%(2)

翻譯后修改

3硫酸化酪氨酸

 

參考

  1. Bringinshaw,GW和Shanberge,JM,Arch。生物化學。Biophys。,161,683(1974)。
  2. Tollefsen,DM,et al。,J.Biol.Chem。Chem。,257,2162(1982)。
  3. Pratt,CW,et al。,Ann。紐約阿卡德。Sci。,556,104(1989)。
  4. Ragg,H.,Nucleic Acids Res。,14,1073(1986)。
  5. Church,F(xiàn)C,et al。,Arch。生物化學。Biophys。,259,331(1987)。
  6. Hortin,G.,et al。,J.Biol。Chem。,261,15827(1986)。
  7. Church,F(xiàn)C,et al。,Proc。國家科。科學院。科學。美國,82,6431(1985)。
  8. Tollefsen,DM和Blank,MK,J。Clin。Invest。,68,589(1981)。
  9. Griffith,MJ,et al。,J.Biol。Chem。,260,2218(1985)。
  10. Tollefsen,DM,et al。,J.Biol.Chem。Chem。,258,6713(1983)。
  11. 格里菲斯,MJ和Marbet,GA,Biochem。生物物理學。RES。Comm。,112,663(1983)。
  12. Abildgaard,U。和Larsen,ML,Thromb。Res。,35,257(1984)。
  13. Griffith,MJ等,Biochemistry,24,6777(1985)。
  14. Parker,K。和Tollefsen,DM,J.Biol。Chem。,260,3501(1985)。

 

 

出版物

  1. Monteiro,R.,et al。,Biochem。J.(2005)387,871-877。(凝血酶原激活)
  2. Reis,C.,et al。,Biochem。J.(2006)398,295-302(凝血酶原激活)

 

 

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