inventbiotech Minute™ 動物細胞/組織總蛋白提取試劑盒

英文特生物技術（北京）有限公司成立于2016年，是美國英文特生物技術股份有限公司（Invent Biotechnologies, Inc.）在華子公司。作為應用離心管柱濾器快速提取蛋白及亞細胞結構分離的先驅，英文特公司成功研發出五十多個生命科學研究領域蛋白提取產品，其中具有多個特色產品，使原有的溶液法升級為柱式提取法，為蛋白提取分離帶來了新方案。全線產品均具有快捷，易用，產量高及重復性好的特性。在短短幾年中，產品以穩定的品質獲得了世界各國越來越多的科研機構和科研者的青睞。英文特公司繼續致力于蛋白提取及純化，亞細胞結構分離，蛋白組學以及蛋白間相互作用的產品開發及應用，為生命科學領域的科研者提供便捷的研究方法和產品。

產品名稱：Minute™ 動物細胞/組織總蛋白提取試劑盒 SD-001/SN-002

Minute™ Total Protein Extraction Kit for Animal Cultured Cells/Tissues

產品描述：

動物細胞/組織總蛋白提取試劑盒，由優化細胞裂解液和0.6ml離心管柱組成，能夠迅速從動物細胞和組織(無脊椎動物和脊椎動物)中提取總蛋白，用于蛋白質分析和進一步純化。試劑盒同時提供天然和變性兩種不同的裂解液，可供用戶根據不同下游實驗進行選擇。離心管柱技術提取蛋白質，樣品量最小可處理20ul，最大可達500ul。從細胞/組織中提取總蛋白質僅需1-8分鐘，得率可達2-8mg/ml。

應用：

可應用于 SDS-PAGE, 免疫印跡, IP, ELISA，酶檢測及其他應用。這個試劑盒提供了更快的總蛋白提取方法。

提取的的蛋白可以用于小型色譜純化柱純化蛋白的原料使用。

試劑盒組分

50 Preps: 4 Preps：

1. 25ml 變性細胞裂解液（SD-001） 1. 2.0ml 變性細胞裂解液（SD-001）

2. 25ml 天然細胞裂解液（SN-002） 2. 2.0ml 天然細胞裂解液（SN-002）

3. 50 個離心管柱 3. 4 個離心管柱

4. 50 個收集管 4. 4 個收集管

5. 2 根塑料研磨棒 5. 1 根塑料研磨棒

**注:試劑盒中的細胞裂解液不含任何還原劑和伯胺。

運輸儲存：常溫運輸，室溫保存。

重要產品信息

1. Minute TM總蛋白提取試劑盒是一款快速總蛋白提取試劑盒。蛋白酶抑制劑不是必須加入，但是如果下游

實驗需要較長時間或者蛋白提取后需要保存較長時間，建議添加蛋白酶抑制劑。研究蛋白磷酸化，磷酸

酶抑制劑應在使用前加入裂解液中。（各類抑制劑的添加方法請按照抑制劑母液比例，例如母液是

100X，添加時按照 1：100 添加，即 1ml 裂解液中添加 10ul 抑制劑）。推薦使用 BCA 試劑盒用于

蛋白濃度測定。

2. 裂解液的使用要根據下游實驗來選擇，變性裂解液（SD-001）適合用于 SDS-PAGE，WB 實驗，天然裂

解液（SN-002）適合用于 ELISA，IP，CO-IP 等實驗。

3. 使用SD-001變性裂解液提取的蛋白和使用SN-002天然裂解液提取的蛋白，做WB上樣前，仍需加Loading 

buffer 混勻煮沸樣品后上樣。

4. 如果變性裂解液在低溫情況下出現沉淀，在 37 度以上孵育至沉淀復溶可正常使用。

所需附加材料

1 X PBS

渦旋震蕩儀

臺式離心機

BCA 蛋白定量試劑盒

操作方法：

細胞樣品總蛋白提取

變性總蛋白提取（SD-001）SDS-PAGE，WB 實驗適用

A．非貼壁細胞

1.將離心管柱（filter cartridges）套入接收管中，成為套管放置于冰上預冷。

2.低速離心收集細胞，在離心管中加入預冷的 PBS，500Xg 離心 2-3 分鐘清洗細胞。棄去上清，剩余與細胞體

積相同體積的 PBS。渦旋震蕩重懸細胞。

3.加入表格 1 中相應體積的細胞裂解液（SD-001），渦旋震蕩裂解細胞。（細胞數量和裂解液須保證對應關系，

以達到最佳提取效率）

請注意：部分未wan全裂解的細胞不會影響樣品質量。

4.將細胞裂解物轉移到預冷的離心管柱套管中，蓋上蓋子，14,000-16,000Xg 離心 30 秒取出。

5. 棄去離心管柱，收集管中即是蛋白樣品，可應用于下游實驗。

B．貼壁細胞

1. 將離心管柱（filter cartridges）套入接收管中，成為套管放置于冰上預冷。

2. 貼壁細胞生長至 90-100%融合時，將預冷的 PBS 直接加入培養板，培養皿或培養瓶中清洗一次，wan全吸

出上清。

3.按照表 2 中將相應體積的細胞裂解液（SD-001）均勻的加入整個器皿表面，用移液器反復吹打幾次以裂解

細胞，將細胞裂解物迅速轉移到預冷的離心管柱套管中，蓋上蓋子，14,000-16,000Xg 離心 30 秒取出。（如提

取濃度不佳，可減少裂解液使用量）

4. 棄去離心管柱，收集管中即是蛋白樣品，可應用于下游實驗。

天然總蛋白提取（SN-002）ELISA，IP，CO-IP，酶活性檢測等實驗適用

A．非貼壁細胞

1. 將離心管柱（filter cartridges）套入接收管中成為套管，與天然細胞裂解液（SN-002）共同放置于冰上預冷。

2. 低速離心收集細胞，在離心管中加入預冷的 PBS 清洗細胞一次，500Xg 離心 2-3 分鐘沉淀細胞。棄去上清，

在管中保留與細胞體積相同體積的 PBS。旋窩震蕩重懸細胞。

3. 加入表格 3 中相應體積的細胞裂解液，渦旋震蕩裂解細胞 15 秒。將離心管放置于冰上 3-5 分鐘然后渦旋震

蕩 10 秒。（細胞數量和裂解液須保證對應關系，以達到最佳提取效率）

4. 將細胞裂解物轉移到預冷的離心管柱套管中，蓋上蓋子，14,000-16,000Xg 離心 30 秒取出。

5. 棄去離心管柱，收集管中即是蛋白樣品，可應用于下游實驗。

B．貼壁細胞

1. 將離心管柱（filter cartridges）套入接收管中成為套管，與天然細胞裂解液（SN-002）共同放置于冰上預冷。

2. 貼壁細胞生長至 90-100%融合時，用預冷的 PBS 清洗細胞兩次，wan全吸出上清。

3. 按照表 4 中將相應體積的細胞裂解液均勻的加入整個器皿表面，放置于冰上孵育 5 分鐘，用移液器反復吹

打以裂解細胞，將細胞裂解物轉移到預冷的離心管柱套管中，蓋上蓋子，14,000-16,000Xg 離心 30 秒取出。（如

提取濃度不佳，可減少裂解液使用量）

4. 棄去離心管柱，收集管中即是蛋白樣品，可應用于下游實驗。

動物組織總蛋白提取

變性總蛋白提取（SD-001）SDS-PAGE，WB 實驗適用

以下步驟是從 15-20mg 動物組織中提取，對于不同的樣品起始量，需按比例調整裂解液的用量。

1. 將離心管柱（filter cartridges）套入接收管中，成為套管放置于冰上預冷。

2. 將 15-20mg 新鮮/冷凍組織放置于離心管柱套管上，用塑料研磨棒向下按壓反復扭轉研磨 50-60 次，加入200ul 變性細胞裂解液（SD-001），繼續研磨 30-60 次。（組織用量不要過量，無需過度研磨，裂解液可分兩次

加入以得到最佳效果）注意：塑料研磨棒可以重復使用，用蒸餾水徹di沖洗干凈，用紙巾擦干。

3. 蓋上蓋子，室溫孵育 1-2 分鐘，14,000-16,000Xg 離心 1-2 分鐘。

4. 棄去離心管柱，收集管中即是蛋白樣品，可應用于下游實驗。

請注意：部分未wan全裂解的組織不會影響樣品質量。

天然總蛋白提取（SN-002）ELISA，IP，CO-IP，酶活性檢測等實驗適用

1. 將離心管柱（filter cartridges）套入接收管中成為套管，與天然細胞裂解液（SN-002）共同放置于冰上預冷。

2. 將 15-20mg 新鮮/冷凍組織放置于離心管柱上，用塑料研磨棒向下按壓反復扭轉研磨 50-60 次，加入 200ul

天然細胞裂解液（SN-002），繼續研磨 30-60 次。（組織用量不要過量，無需過度研磨，裂解液可分兩次加入

以得到最佳效果）。注意：塑料研磨棒可以重復使用，用蒸餾水徹di沖洗干凈，用紙巾擦干。

3. 開蓋冰上孵育 5 分鐘，蓋上蓋子，4℃，14,000-16,000Xg 離心 1-2 分鐘。

4. 棄去離心管柱，收集管中即是蛋白樣品，可應用于下游實驗

常見問題